Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Ст = С20 [1 + 0,021 (Т-20)],
где:
Т - температура, при которой проводят измерения, указанная в частной статье; СТ - электропроводность раствора при ТоС;
С20 - электропроводность раствора при температуре 20оС.
ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ Определение постоянной камеры
Выбирают измерительную камеру, соответствующую электропроводности испытуемого растора. Чем выше ожидаемая электропроводность, тем большей должны быть постоянная камеры (ниже р), то есть измеряемое значение R должно быть настолько высоким, насколько позволяет используемый прибор. Обычно определения измерительной камеры имеют постоянную порядка 0,1 см-1, 1 см-1 и 10 см-1. Определяют тот из стандартных растворов калия хлорида Р, который больше подходит для проведения измерений. Измерительную камеру несколько раз промывают водой, свободной от диоксида углерода, Р, приготовленной из воды дистиллированной Р, и по крайней мере дважды раствором калия хлорида, используемого для определения постоянной камеры. Измеряют удельное сопротивление заполненной раствором калия хлорида камеры при температуре (20+0,1)оС или при температуре, указанной в частной статье. Постоянную С (см-1) измерительной камеры рассчитывают по формуле:
С - Rkci ' k kci ,
где:
RKCl - сопротивление измерений в мегоомах;
k KCl - электропроводность используемого стандартного раствора калия хлорида Р, в мкСм • см-1.
Измеренное значение постоянной С камеры не должно отличаться от указанного более, чем на 5%.
Определение удельной электропроводности испытуемого раствора
После того, как прибор откалиброван с использованием одного из стандартных растворов, измерительную камеру промывают несколько раз водой, свободной от диоксида углерода, Р, приготовленной из воды дистиллированной Р, и по крайней мере дважды водным испытуемым раствором при температуре (20+0,1)оС или при температуре, указанной в частной статье. Затем измерения проводят так, как указано в частной статье.
2.2.39. МОЛЕКУЛЯРНО-МАССОВОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ДЕКСТРАНОВ
Определение проводят методом эксклюзионной хроматографии (2.2.30).
Испытуемый раствор. 0,200 г испытуемой субстанции растворяют в подвижной фазе и доводят объем раствора этим же растворителем до 10 мл.
Маркерный раствор. 5 мг глюкозы Р и 2 мг декстрана Vo ФСО растворяют в 1 мл подвижной фазы.
Градуировочные растворы. Навеску каждого из указанных стандартных образцов: 15 мг декстрана 4 для градуировки ФСО, 15 мг декстрана 10 для градуировки ФСО, 20 мг декстрана 40 дляградуировки ФСО, 20 мг декстрана 70 для градуировки ФСО и 20 мг декстрана 250 для градуировки ФСО отдельно растворяют в 1 мл подвижной фазы.
# Возможно использование стандартных образцов декстранов для градуировки с другими паспортными данными Мw, в этом случае для градуировки хроматографической системы рекомендуется использовать дополнительно еще не менее двух стандартных образцов декстранов.
# Условия хроматографирования как, например, размер и количество колонок, тип сорбента, состав и скорость подвижной фазы, объем вводимой пробы и другие параметры, указываются в частных статьях и могут варьировать. При этом должны выполняться требования к градуировке и условия теста «Проверка пригодности хроматографической системы»
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. 20 мг декстрана 40 для проверки пригодности хроматографической системы ФСО (для анализа субстанции декстрана 40) или 20 мг декстрана 60/70 для проверки пригодности хроматографической системы ФСО (для анализа субстанций декстрана 60 и декстрана 70) растворяют в 1 мл подвижной фазы.
Хроматографирование может быть проведено на хроматографе с дифференциальным рефрактометрическом детектером при следующих условиях:
- колонка, заполненная агарозой поперечно-сшитой для хроматографии Р или серий колонок размером 0,3 м х 10 мм каждая, заполненные полиэфирным гидроксилованным гелем для хроматографии Р;
- подвижная фаза: раствор 7 г натрия сульфата безводного Р и 1 г хлорбутанола Р в 1 л воды Р;
- скорость подвижной фазы от 0,5 мл/мин до 1 мл/мин, поддерживаемая постоянно с точностью +1% в час;
- петлевой дозатор с объемом петли от 100 мкл до 200 мкл;
- температура системы поддерживается постоянной с точностью +0,1 оС.
ГРАДУИРОВКА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ
Хроматографируют несколько раз выбранный объем маркерного раствора. На хроматограмме должны присутствовать два пика: первый пик соответствует декстрану V0 ФСО, второй пик соответствует декстрозе (глюкозе) Р. Исходя из объема элюирования декстрана V0, рассчитывают объем эксклюзии V0; полный объем Vt рассчитывают по пику, соответствующему глюкозе.
Хроматографируют определенный объем каждого из градуировочных растворов. Для каждой полученной хромотограммы проводят базовую линию, обращая внимание на правильнойть определения начала и конца пика. Каждую хроматограмму делят вертикальными равноудаленными линиями на р секций (количеством не менее 60), что соответствует равным объемам элюирования. Для каждой секции i, соответствующей объему элюирования V, измеряют высоту (у) от базовой линии до линии хроматограммы и рассчитывают коэффициенты распределения (К) по формуле:
